Génération et caractérisation de cellules souches pluripotentes induites provenant de patients pour la modélisation de maladies, la découverte de médicaments et les applications en médecine régénérative.
La plateforme médicale de production de cellules souches induites à la pluripotence du Centre de recherche du Centre hospitalier universitaire (CHU) de Québec – Université Laval offre une expertise de pointe en matière de génération et de caractérisation des cellules souches pluripotentes induites (CSPi) d’humains. La plateforme se spécialise dans l’obtention de CSPi à partir de sources somatiques primaires, dont les fibroblastes dermiques, les cellules mononucléées du sang périphérique, les cellules urinaires ou les lignées cellulaires lymphoblastoïdes, grâce à la reprogrammation non intégrative par le virus Sendai (VSe), dans le but d’assurer la stabilité et la reproductibilité génomiques.
L’équipe propose des processus complets de contrôle de la qualité, dont l’évaluation morphologique, l’expression des marqueurs de pluripotence, le caryotypage et la différenciation spontanée en trois lignées, garantissant ainsi des lignées de CSPi de haute qualité convenant aux applications en aval. Ces lignées constituent des outils puissants pour la modélisation des maladies, la validation des cibles thérapeutiques, le criblage de médicaments et les techniques de médecine régénérative.
La force de la plateforme réside dans la combinaison d’une expertise technique de pointe avec une normalisation et une reproductibilité rigoureuses.
• Isolement et culture de fibroblastes à partir de biopsies cutanées de patients
• Isolement de cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) et préparation à la reprogrammation
• Isolement de cellules urinaires et préparation à la reprogrammation
• Reprogrammation de cellules souches pluripotentes induites (CSPi) par une méthode non intégrative utilisant le virus Sendai
• Expansion et cryoconservation de lignées de CSPi pour un stockage à long terme
• Processus complet de contrôle de la qualité et de caractérisation, comprenant l'évaluation morphologique; l'expression des marqueurs de pluripotence (immunocytochimie, cytométrie en flux, réaction de polymérisation en chaîne quantitative [PCR quantitative]); le caryotypage pour la stabilité génomique; les essais de différenciation spontanée en trois lignées
• Ateliers de formation pratique (annuels et à la demande) pour les chercheurs et les chercheuses dans les universités, les cliniques et les entreprises
• Consultation et expertise en matière de conception de projet, de stratégie expérimentale et d’applications des cellules souches pluripotentes induites (CSPi)
- Sciences de la vie, produits pharmaceutiques et équipement médical
- Services publics
Laboratoires et équipements spécialisés
| Équipement | Fonction |
|---|---|
| Trieur de cellules FACSMelody, modèle 661588, de BD Biosciences | Effectuer une cytométrie en flux pour la caractérisation quantitative des protéines impliquées dans l’autorenouvellement des cellules souches pluripotentes induites (CSPi). |
| Système de PCR numérique par gouttelettes QX600 de Bio-Rad | Utiliser la technique de réactions de polymérisation en chaîne (PCR) pour le caryotypage des cellules souches pluripotentes induites (CSPi) à l’aide de la trousse iCS-digital PSC de Stem Genomics. |
| Système de PCR en temps réel Applied Biosystems QuantStudio 5 de ThermoFisher Scientific | Utiliser la technique réactions de polymérisation en chaîne quantitative (QPCR) – système à 384 puits compatible avec la trousse TaqMan hPSC Scorecard; mesurer l’expression génique propre aux CSPi et valider l’élimination des transgènes du virus Sendai (VSe). |
| Compteur cellulaire automatisé CellDrop FL de DeNovix | Déterminer la concentration et la viabilité cellulaires. |
| Microscope confocal Axio Imager LSM 700 de ZEISS | Observer par immunofluorescence l’expression qualitative des protéines d’auto-renouvellement. |
| Microscope stéréoscopique dynascopique Lynx de Vision Engineering | Effectuer le prélèvement manuel stérile de colonies. |
| Spectrophotomètre NanoDrop 2000c de ThermoFisher Scientific | Effectuer la quantification de l’ARN et de l’ADN. |